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懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟與注意事項(xiàng)有哪些？

懸浮培養(yǎng)指的是一種在受到不斷攪動(dòng)或搖動(dòng)的液體培養(yǎng)基里，培養(yǎng)單細(xì)胞及小細(xì)胞團(tuán)的組織培養(yǎng)系統(tǒng)，那么懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟與注意事項(xiàng)有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、步驟1.將準(zhǔn)備好的凍存細(xì)胞放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對(duì)頂端進(jìn)行消毒，用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有5mlwan全MEM-10培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。3.將培養(yǎng)基吸出，用0.5ml37℃的胰酶/EDTA覆蓋細(xì)胞，消化30~40...

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貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的步驟有哪些？

在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，必須有可以貼附的支持物表面，其依靠自身分泌或培養(yǎng)基中的貼附因子才能在該表面生長(zhǎng)增殖的離體動(dòng)物的培養(yǎng)細(xì)胞。那么貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的步驟有那些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！1.將含有凍存細(xì)胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對(duì)安瓿的頂端進(jìn)行消毒，打開安瓿，用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有5ml起始培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，將其放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。3.吸出起始培養(yǎng)基，換成適當(dāng)?shù)木S持培養(yǎng)基。將細(xì)胞放回CO...

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如何確認(rèn)RNA的質(zhì)量？

樣本種類繁多且復(fù)雜，有些樣本，要想提取到質(zhì)量良好的RNA是非常困難的，那么該如何確認(rèn)RNA的質(zhì)量呢？讓我們一起來(lái)看看吧！確認(rèn)RNA的質(zhì)量有以下兩種常見方法1）檢測(cè)RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時(shí)，我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的，不過(guò)要注意，當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí)，R值可能會(huì)大于...

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如何提高DNA純度測(cè)定的準(zhǔn)確性？

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常需要對(duì)樣本進(jìn)行濃度和純度的測(cè)定，它相當(dāng)于一種質(zhì)控，以此來(lái)確保下游實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可靠。那么該如何提高DNA純度測(cè)定的準(zhǔn)確性呢？讓我們一起來(lái)看看吧！常用的DNA濃度/純度測(cè)定設(shè)備是紫外分光光度計(jì)，它的原理是利用物質(zhì)分子對(duì)紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來(lái)進(jìn)行分析物質(zhì)成分。假設(shè)現(xiàn)在有一樣物質(zhì)A，它溶解在溶液內(nèi)，當(dāng)光照射溶液時(shí)，溶液內(nèi)的A會(huì)吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長(zhǎng)，A對(duì)不同顏色的光（不同波長(zhǎng)）的吸收程度是不一樣的。雙鏈的DNA，它能對(duì)波長(zhǎng)為260nm的光進(jìn)行強(qiáng)...

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常見的RNA提取方法

不同組織RNA提取原理是將細(xì)胞裂解，釋放出RNA，并通過(guò)不同方式去除蛋白，DNA等雜質(zhì)，最終獲得高純度RNA產(chǎn)物的過(guò)程。那么你知道常見的RNA提取方法有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、酚氯仿抽提（有機(jī)試劑抽提）原理：將被裂解的生物樣本，混勻離心分相以后，RNA在上層水相，DNA，蛋白質(zhì)在中間層，下層有機(jī)相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA，漂洗后得到RNA。優(yōu)點(diǎn)：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。缺點(diǎn)：用到苯酚、氯仿等有毒試劑。二、硅膠柱法抽提原理...

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