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免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟有哪些？

免疫熒光（IF）是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)。可用于檢測(cè)和識(shí)別細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)及其他分子的亞細(xì)胞分布和遷移。那么你知道免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞準(zhǔn)備對(duì)于單層生長(zhǎng)的細(xì)胞，將細(xì)胞接種到預(yù)先處理過(guò)的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層后取出蓋玻片，用PBS洗滌兩次。對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）兩次，然后用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片。二、固定根據(jù)需要...

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細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的原理

哺乳動(dòng)物細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染能在短期內(nèi)快速表達(dá)高活性蛋白而被廣泛應(yīng)用。那么細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的原理是什么？讓我們一起來(lái)看看吧！哺乳動(dòng)物細(xì)胞自身具有蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，獲得的蛋白更具有天然活性。哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)蛋白的方式有兩種：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的特點(diǎn)是短期快速表達(dá)，滿足蛋白的小量制備。而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系能夠滿足蛋白的大量、長(zhǎng)期生產(chǎn)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的原理是指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過(guò)某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂，...

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ELISA主要材料試劑有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡(jiǎn)寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么ELISA主要材料試劑有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、抗原和抗體在ELISA實(shí)施過(guò)程中，抗原和抗體的質(zhì)量決定實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價(jià)高、親和力強(qiáng)。ELISA所用抗原有三個(gè)來(lái)源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物...

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ELISA的常見問(wèn)題有哪些？解決方法是什么？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡(jiǎn)寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么你知道ELISA的常見問(wèn)題有哪些？解決方法是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、高背景或陰性對(duì)照只偏高原因：1.陰性對(duì)照孔被陽(yáng)性對(duì)照貨樣品污染2.抗體非特異性結(jié)合3.酶結(jié)合物過(guò)濃4.孵育溫度過(guò)高解決方法：1.洗滌是，勿將洗液溢出孔外2.封閉液不合適，更換封閉液3.請(qǐng)...

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PCR引物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵點(diǎn)有哪些？

PCR引物是人工合成的一段寡聚核苷酸。引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，因此，PCR的首要任務(wù)就是引物設(shè)計(jì)。那么你知道PCR引物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵點(diǎn)有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)DNA序列的保守區(qū)是通過(guò)物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過(guò)序列分析軟件（比如DNAman）比對(duì)（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。二、引物長(zhǎng)度一般在15~30堿基之間引物長(zhǎng)度（primerlength）常用的是18-...

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